ⅠNucleic acidipagpapakilala
Ang nucleic acid ay nahahati sa deoxyribonucleic acid (DNA) at ribonucleic acid (RNA), kung saan ang RNA ay nahahati sa ribosomal RNA(rRNA), messenger RNA(mRNA) at transfer RNA(tRNA) ayon sa iba't ibang function nito.Ang DNA ay pangunahing puro sa nucleus, mitochondria at chloroform, habang ang RNA ay pangunahing ipinamamahagi sa cytoplasm.Bilang materyal na batayan ng pagpapahayag ng gene, ang pagkuha ng nucleic acid ay gumaganap ng isang napakahalagang papel sa pananaliksik sa molecular biology at clinical molecular diagnosis.Ang konsentrasyon at kadalisayan ng pagkuha ng nucleic acid ay direktang makakaapekto sa kasunod na PCR, sequencing, vector construction, enzyme digestion at iba pang mga eksperimento.
Ⅱ Paraan ng pagkuha at paglilinis ng nucleic acid
① Paraan ng pagkuha ng Phenol/chloroform
Ang phenol/chloroform extraction ay isang klasikal na paraan para sa DNA extraction, na pangunahing gumagamit ng dalawang magkaibang organikong solvent para gamutin ang mga sample, pagtunaw ng DNA based na nucleic acid sa water phase, lipids sa organic phase, at mga protina sa pagitan ng dalawang phase.Ang pamamaraang ito ay may mga pakinabang ng mababang gastos, mataas na kadalisayan at magandang epekto.Ang mga disadvantages ay kumplikadong operasyon at mahabang panahon.
② Trizol na pamamaraan
Ang pamamaraan ng Trizol ay isang klasikal na pamamaraan para sa pagkuha ng RNA.Ang pamamaraan ng Trizol ay nahahati sa aqueous phase at organic phase pagkatapos ng centrifugation na may chloroform, kung saan ang RNA ay dissolved sa aqueous phase, ang aqueous phase ay inililipat sa isang bagong EP tube, ang precipitation ay nakuha pagkatapos magdagdag ng isopropanol, at pagkatapos ay ethanol purification.Ang pamamaraang ito ay angkop para sa pagkuha ng RNA mula sa mga tisyu ng hayop, mga selula at bakterya.
③ Paraan ng pagdalisay ng centrifugal column
Centrifuge column purification method ay maaaring mag-adsorb ng DNA partikular sa pamamagitan ng mga espesyal na silicon matrix adsorption na materyales, habang ang RNA at protina ay maaaring pumasa ng maayos, at pagkatapos ay gumamit ng mataas na asin na mababa ang PH upang pagsamahin ang nucleic acid, mababang asin mataas na PH value elution upang paghiwalayin at linisin ang nucleic acid.Ang mga bentahe ay mataas na konsentrasyon ng purification, mataas na katatagan, hindi na kailangan para sa organic solvent, at mababang gastos.Ang kawalan ay kailangan itong ma-centrifuge nang hakbang-hakbang, higit pang mga hakbang sa operasyon.
④ Paraan ng magnetic beads
Ang pamamaraan ng magnetic beads ay upang hatiin ang sample ng cell tissue sa pamamagitan ng lysate, ilabas ang nucleic acid sa sample, at pagkatapos ay ang mga molekula ng nucleic acid ay partikular na na-adsorbed sa ibabaw ng magnetic bead, habang ang mga impurities tulad ng mga protina at asukal ay naiwan sa ang likido.Sa pamamagitan ng mga hakbang ng paghahati ng cell tissue, magnetic bead binding na may nucleic acid, paghuhugas ng nucleic acid, elution ng nucleic acid, atbp., sa wakas ay nakuha ang purong nucleic acid.Ang mga bentahe ay simpleng operasyon at maikling oras na paggamit, nang hindi nangangailangan ng step centrifugation.Ito ay may mababang mga teknikal na kinakailangan at maaaring mapagtanto ang awtomatiko at mass operation.Ang partikular na kumbinasyon ng magnetic bead at nucleic acid ay gumagawa ng nakuhang nucleic acid na may mataas na konsentrasyon at kadalisayan.Ang kawalan ay ang kasalukuyang presyo sa merkado ay medyo mahal.
⑤ Iba pang mga pamamaraan
Bilang karagdagan sa apat na pamamaraan sa itaas, mayroong pag-crack ng kumukulo, concentrated salt method, anionic detergent method, ultrasonic method at enzymatic method, atbp.
Ⅲ Uri ng pagkuha ng nucleic acid
Ang Foregene ay may nangungunang Direct PCR platform sa buong mundo, double-column RNA Isolation platform(DNA-only + RNA only ).Kabilang sa mga pangunahing produkto ang DNA/RNA isolation kit, PCR at Direct PCR reagents molecular lab reagents series.
① Kabuuang pagkuha ng RNA
Kasama sa kabuuang sample ng RNA extraction ang dugo, mga cell, tissue ng hayop, halaman, virus, atbp. Ang mataas na kadalisayan at mataas na konsentrasyon ng kabuuang RNA ay maaaring makuha sa pamamagitan ng kabuuang RNA extraction, na maaaring magamit sa RT-PCR, pagsusuri ng chip, in vitro translation, molecular cloning, Dot Blot at iba pang mga eksperimento.
May kaugnayan sa foregeneRNA Isolation Kit
Animal Total RNA Isolation Kit--Mabilis at mahusay na i-extract ang high-purity at de-kalidad na kabuuang RNA mula sa iba't ibang tissue ng hayop.
Cell Total RNA Isolation Kit--Ang mataas na purified at mataas na kalidad na kabuuang RNA ay maaaring makuha mula sa iba't ibang kulturang mga cell sa loob ng 11 minuto.
Plant Total RNA Isolation Kit--Mabilis na kunin ang mataas na kalidad na kabuuang RNA mula sa mga sample ng halaman na may mababang polysaccharide at polyphenol na nilalaman.
Viral RNA Isolation Kit--Mabilis na ihiwalay at linisin ang viral RNA mula sa mga sample gaya ng plasma, serum, mga cell-free na likido sa katawan at mga supernatant ng cell culture.
② Pagkuha ng genomic DNA
Kasama sa mga sample ng genomic DNA extraction ang lupa, dumi, dugo, cell, tissue ng hayop, halaman, virus, atbp. Maaaring gamitin ang Genomic DNA extraction sa enzyme digestion, DNA library construction, PCR, paghahanda ng antibody, Western blot hybridization analysis, gene chip, high -throughput sequencing at iba pang mga eksperimento.
May kaugnayan sa foregeneMga Kit ng Pagbubukod ng DNA
Animal Tissue DNA Isolation Kit--Mabilis na pagkuha at paglilinis ng genomic DNA mula sa maraming pinagmumulan, tulad ng mga tissue ng hayop, mga cell, atbp.
Blood DNA Midi Kit (1-5ml)--Mabilis na linisin ang mataas na kalidad na genomic DNA mula sa anticoagulated na dugo (1-5ml).
Buccal Swab/FTA Card DNA Isolation Kit--Mabilis na linisin ang mataas na kalidad na genomic DNA mula sa mga sample ng buccal swab/FTA Card.
Plant DNA Isolation Kit--Mabilis na linisin at kumuha ng mataas na kalidad na genomic DNA mula sa mga sample ng halaman (kabilang ang polysaccharides at polyphenol na mga sample ng halaman)
③ Pagkuha ng plasmid
Ang Plasmid ay isang uri ng pabilog na maliit na molekulang DNA sa mga selula, na isang karaniwang carrier para sa recombination ng DNA.Ang paraan ng plasmid extraction ay upang alisin ang RNA, paghiwalayin ang plasmid mula sa bacterial genomic DNA, at alisin ang protina at iba pang mga impurities upang makakuha ng medyo purong plasmid.
Pangkalahatang Plasmid Mini Kit--Mabilis na linisin ang mataas na kalidad na plasmid DNA mula sa nabagong bakterya para sa mga nakagawiang eksperimento sa molecular biology tulad ng pagbabagong-anyo at pantunaw ng enzyme
④ Iba pang mga uri ng pagkuha, pagkuha ng miRNA, atbp.
Animal miRNA Isolation Kit--Mabilis at mabisang kunin ang maliliit na RNA fragment ng 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA mula sa iba't ibang tissue at cell ng hayop
Ⅳ Mga kinakailangan para sa pagkuha ng nucleic acid at resulta ng pagliliniss
① Upang matiyak ang integridad ng pangunahing istraktura ng nucleic acid.
② Bawasan ang interference ng mga protina, asukal, lipid at iba pang macromolecules
③ Dapat ay walang organikong solvent o mataas na konsentrasyon ng mga metal ions na maaaring humadlang sa enzyme sa mga sample ng nucleic acid.
④ Ang RNA at iba pang kontaminasyon ng nucleic acid ay dapat alisin kapag kumukuha ng DNA, at vice versa.
Oras ng post: Nob-24-2022
